流式細(xì)胞儀的電壓和增益參數(shù)優(yōu)化

慧儀儀器

優(yōu)化流式細(xì)胞儀的電壓和增益參數(shù)是確保信號(hào)檢測(cè)準(zhǔn)確性和實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性的關(guān)鍵步驟。以下是詳細(xì)的操作指南：  
?一、理解電壓和增益的作用  
?電壓：調(diào)節(jié)光電倍增管的靈敏度，影響信號(hào)放大倍數(shù)。電壓過高會(huì)導(dǎo)致信號(hào)飽和（過曝），過低則無法檢測(cè)弱信號(hào)。  
?增益：部分儀器通過增益調(diào)整信號(hào)放大倍數(shù)，與電壓配合使用，確保信號(hào)在檢測(cè)器的線性動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)。  
?二、優(yōu)化參數(shù)的準(zhǔn)備工作  
?樣本準(zhǔn)備  
?陰性對(duì)照：未染色的細(xì)胞或同型對(duì)照，用于確定背景信號(hào)。  
?陽性對(duì)照：明確表達(dá)目標(biāo)抗原的細(xì)胞，用于驗(yàn)證信號(hào)強(qiáng)度。  
?校準(zhǔn)微球：如熒光微球，用于標(biāo)準(zhǔn)化儀器性能。  
?儀器預(yù)熱  
開機(jī)后預(yù)熱30分鐘，確保激光器和液流系統(tǒng)穩(wěn)定。  
?三、分步優(yōu)化電壓和增益  
?步驟1：初始參數(shù)設(shè)定  
使用儀器默認(rèn)電壓或歷史實(shí)驗(yàn)的合理參數(shù)作為起點(diǎn)。  
若首次使用，參考儀器手冊(cè)或校準(zhǔn)微球說明書推薦值。  
?步驟2：調(diào)整前向散射（FSC）和側(cè)向散射（SSC）?  
運(yùn)行陰性對(duì)照樣本，觀察FSC和SSC的分布。  
調(diào)節(jié)FSC和SSC的電壓，使細(xì)胞群集中在散點(diǎn)圖中央（避免信號(hào)超出坐標(biāo)軸）。  
?目標(biāo)：細(xì)胞群清晰可見，碎片和噪音信號(hào)被閾值過濾。  
?步驟3：優(yōu)化熒光通道電壓  
?單色樣本法：  
分別運(yùn)行單個(gè)熒光標(biāo)記的陽性樣本。  
調(diào)節(jié)對(duì)應(yīng)通道的電壓，使陽性信號(hào)峰值位于對(duì)數(shù)坐標(biāo)的中間偏右（如103~10?區(qū)間）。  
陰性對(duì)照信號(hào)應(yīng)集中在左側(cè)（接近10?）。  
?電壓滴定法?（推薦）?：  
使用同一陽性樣本，逐步增加電壓（如每次增加50V），記錄信號(hào)分布。  
選擇使陽性與陰性信號(hào)分離最佳且無飽和的**電壓。  
?步驟4：驗(yàn)證多色實(shí)驗(yàn)的兼容性  
運(yùn)行多色混合樣本，檢查熒光滲漏（補(bǔ)償問題）。  
若補(bǔ)償后仍有干擾，可能需要微調(diào)電壓或更換光譜重疊較少的染料組合。  
?步驟5：使用校準(zhǔn)微球標(biāo)準(zhǔn)化  
運(yùn)行校準(zhǔn)微球（如8峰微球），確保各熒光通道的電壓使微球信號(hào)峰均勻分布。  
記錄標(biāo)準(zhǔn)化參數(shù)，便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)重復(fù)。

九華閥門

這個(gè)問題我也遇到過，后來這樣解決的...

鐵馭

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