流式細胞儀的電壓和增益參數(shù)優(yōu)化

慧儀儀器

優(yōu)化流式細胞儀的電壓和增益參數(shù)是確保信號檢測準確性和實驗可重復性的關鍵步驟。以下是詳細的操作指南：  
?一、理解電壓和增益的作用  
?電壓：調(diào)節(jié)光電倍增管的靈敏度，影響信號放大倍數(shù)。電壓過高會導致信號飽和（過曝），過低則無法檢測弱信號。  
?增益：部分儀器通過增益調(diào)整信號放大倍數(shù)，與電壓配合使用，確保信號在檢測器的線性動態(tài)范圍內(nèi)。  
?二、優(yōu)化參數(shù)的準備工作  
?樣本準備  
?陰性對照：未染色的細胞或同型對照，用于確定背景信號。  
?陽性對照：明確表達目標抗原的細胞，用于驗證信號強度。  
?校準微球：如熒光微球，用于標準化儀器性能。  
?儀器預熱  
開機后預熱30分鐘，確保激光器和液流系統(tǒng)穩(wěn)定。  
?三、分步優(yōu)化電壓和增益  
?步驟1：初始參數(shù)設定  
使用儀器默認電壓或歷史實驗的合理參數(shù)作為起點。  
若首次使用，參考儀器手冊或校準微球說明書推薦值。  
?步驟2：調(diào)整前向散射（FSC）和側(cè)向散射（SSC）?  
運行陰性對照樣本，觀察FSC和SSC的分布。  
調(diào)節(jié)FSC和SSC的電壓，使細胞群集中在散點圖中央（避免信號超出坐標軸）。  
?目標：細胞群清晰可見，碎片和噪音信號被閾值過濾。  
?步驟3：優(yōu)化熒光通道電壓  
?單色樣本法：  
分別運行單個熒光標記的陽性樣本。  
調(diào)節(jié)對應通道的電壓，使陽性信號峰值位于對數(shù)坐標的中間偏右（如103~10?區(qū)間）。  
陰性對照信號應集中在左側(cè)（接近10?）。  
?電壓滴定法?（推薦）?：  
使用同一陽性樣本，逐步增加電壓（如每次增加50V），記錄信號分布。  
選擇使陽性與陰性信號分離最佳且無飽和的**電壓。  
?步驟4：驗證多色實驗的兼容性  
運行多色混合樣本，檢查熒光滲漏（補償問題）。  
若補償后仍有干擾，可能需要微調(diào)電壓或更換光譜重疊較少的染料組合。  
?步驟5：使用校準微球標準化  
運行校準微球（如8峰微球），確保各熒光通道的電壓使微球信號峰均勻分布。  
記錄標準化參數(shù)，便于后續(xù)實驗重復。

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這個問題我也遇到過，后來這樣解決的...

鐵馭

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